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如何解決ELISA檢測試劑盒的“花板”問題
點擊次數:80 發布時間:2019-10-25

ELISA檢測試劑盒吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體,適用血清、血漿、組織勻漿液、細胞培養上清液、尿液等等多種標本類型。“花板”問題是ELISA檢測試劑盒比較常見的一個問題,那么客戶在遇到這類問題時,該如何處理呢?

在ELISA檢測試劑盒結果"花板"的這一問題中,對檢測數據造成很大影響,往往會使檢測者做出誤判,是實驗中必須要注意和避免的。針對這個問題,我們建議從以下幾點出發:

一、標本/試劑/儀器

1.標本:出入境人員的血液標本。

2.試劑:HBsAg、HCV、HIV、梅毒試劑均為不同廠家的ELISA檢測試劑盒。

3.儀器:腦心機,洗板機,酶標儀。

二、方法。所有被檢出入境人員的血液標本,按照各個廠家提供的ELISA檢測試劑盒說明書進行HBsAg-HCV-HIV梅毒等檢驗項目操作。所有試劑均在有效期內使用。

三、結果。所使用不同廠家的試劑有時會出現“花板”問題。

四、分析

在所有標本進行檢測的過程中,所用的儀器及加樣過程都處于正常狀態的情況下,步驟均按照各種試劑說明書的要求去做,排除實驗所用儀器和操作步驟對實驗結果的影響外,ELISA檢測試劑盒內的空白、陰性和陽性對照以及室內質控值都很正常,只有檢測的血液標本情況異常。根據國家和疾控中心報告陽性率的比例不應該是很高的情況下,HBsAg在用Elisa之前都經過了快速金標試劑的檢測,陽性標本得到了一定的控制。因此,原因可能是在標本的處理,特別是放置時間、離心速度和離心時間方面的問題。所以,標本的處理就成為實驗結果的主要可疑因素。

為了避免“花板”現象的出現,降低檢測的假陽性率,獲取準確的實驗結果,小編建議應選擇靈敏度高、特異性好、穩定性好、批間差小、操作方便省時的ELISA檢測試劑盒。

另外,小編再介紹下ELISA檢測試劑盒血清標本的保存建議:

1.樣本的采集及血清分離中要注意盡量避免細菌污染,一則細菌的生長,其所分泌的一些酶可能會對抗原抗體等蛋白產生分解作用;二則一些細菌的內源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶本身會對用相應酶作標記的測定方法產生非特異性干擾。

2.血清標本如是以無菌操作分離,則可以在2~8℃下保存一周,ELISA如為有菌操作,則建議冰凍保存。樣本的長時間保存,應在-70℃以下。

3.冰凍保存的血清標本須注意避免因停電等造成的反復凍融。標本的反復凍融所產生的機械剪切力將對標本中的蛋白等分子產生破壞作用,從而引起假陰性結果。此外,凍融標本的混勻亦應注意,不要進行劇烈振蕩,反復顛倒混勻即可。

4.標本在保存中如出現細菌污染所致的混濁或絮狀物時,應離心沉淀后取上清檢測。

5.要注意避免出現嚴重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團,其有類似過氧化物的活性,因此,在以HRP為標記酶的測定中,如血清標本中血紅蛋白濃度較高,則其就很容易在溫育過程中吸附于固相,從而與后面加入的HRP底物反應顯色。

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