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ELISA試劑盒HIV抗體檢測操作要點
點擊次數:112 發布時間:2020-03-23

    ELISA試劑盒HIV抗體檢測操作要點
    ELISA試劑盒HIV抗體檢測是發現HIV感染的有效途徑,ELISA法是艾滋病初篩試驗室檢測HIV抗體普遍使用的方法之一。具體操作過程中ELISA法的影響因素較多,稍有不慎就會降低實驗的準確性。避免諸多影響因素、保證結果準確性,才能夠充分發揮ELISA法的優點,經過多次實驗的總結和分析,這篇文章分享了相關的經驗。

    1 試劑的選擇
    通常所使用的ELISA試劑盒或其它試劑,必須是經國家食品藥品監督管理局注冊批準、批檢合格、臨床評估質量優良,并且均在有效期內使用。不同批號試劑組分不得混用,過期的試劑一律不得使用,首先提升實驗結果的可信度。

    2 ELISA試劑盒樣品的采集與保存
    用于檢測的標本應保持新鮮,標本的采集應盡量避免溶血,因紅細胞破裂可釋放過氧化物酶活性物質,干擾結果,會出現假陽性;標本如果受細菌污染,會因菌體中含有內源性過氧化物酶而出現假陽性;混濁或有沉淀的血清樣品應離心,待澄清后方可檢測,避免對結果造成影響。
用于HIV抗體檢測的血清或血漿樣品應存放于-20 ℃以下,短期(1周內)進行檢測的樣品可存放于2 ℃~8 ℃。融解時應上下顛倒充分混勻,動作要輕緩,避免產生氣泡。同時應注意避免樣品反復凍融,否則會造成樣品抗體效價降低,影響其結果。

    3 加樣
    加樣前應注意將微孔板條從冷藏環境中取出放置室溫,待試劑平衡后方可使用,未用完者需放入有干燥劑的密封袋中保存。整個HIV抗體檢測必須符合《全國艾滋病檢測技術規范》,嚴格防止交叉感染。操作時必須戴手套、穿工作衣,嚴格執行消毒隔離制度。
加樣要用微量移液器(要求準確性高并定期進行校正),按規定的量加入孔內,避免加在孔壁的邊緣,垂直加樣,不要使吸頭碰到酶標板孔上的已包被的抗原,加樣時盡量慢吸快放,同時注意不要濺出,避免產生氣泡。
每次加樣都要更換吸頭,做到一樣一吸頭,防止發生交叉污染,干吸頭預先在血清中抽吸3次,以便保證加樣量的準確性。滴加試劑應先將滴瓶搖勻并擠去*滴后再進行滴加,以免產生氣泡。

    4 ELISA試劑盒溫育
    抗原抗體反應需要在一定的溫度下(zui適溫度為37 ℃),經過一定的時間才能達到反應的平衡點。溫育一般采用能使反應液溫度迅速達到平衡的水育法,一種是放在水育箱的隔板上,另一種是放在溫箱的濕盒內,水要浸至板條的1/3處,不可將板條疊加放置,以保證各板的溫度平衡一致。

    5 洗板
    由于待檢血清中可能有HIV病毒的存在,采用ELISA法進行檢測HIV抗體時,盡量使用洗板機洗板,一方面可以確保檢測人員的安全,另一方面可以防止環境污染。洗板在ELISA檢測中是一個非常重要的環節,洗板的合格與否直接影響檢測結果的準確性。因此,洗板時一定要先放好,洗滌開始時注意觀察洗板機上的每個吸液針是否都一致地插入孔底,并且將孔內液體全部吸干,按說明書要求設置浸泡的時間以及洗滌的次數。洗滌結束后進行拍板,同時要用蒸餾水沖洗管道,避免由于洗液的結晶而造成管道堵塞。同時要注意各種ELISA試劑盒的洗滌液不可混用。

    6 ELISA試劑盒顯色與觀察結果
    按照說明書規定的時間、溫度恒定、反應后終止,并在顯色反應終止后立即用酶標儀進行比色。

    7 小結
    ELISA試劑盒在加液與混勻過程中不應產生氣泡,否則會使測定的OD值偏高,易出現假陽性結果。

    ELISA法是艾滋病初篩試驗室檢測HIV抗體普遍使用的方法,選擇合格的試劑和儀器,操作中嚴格按照ELISA試劑盒說明書要求實驗,這樣就能保證檢測結果的準確性。

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